PCR quantitative en temps réel Présentiel
Dernière mise à jour : 08/10/2025
Description
Cours et travaux dirigés
- Principes de la PCR et de la PCR quantitative en temps réel, choix des amorces, choix de la technique et des fluorophores utilisés. Notion de Ct, calcul de l'efficacité, résolution des problèmes de spécificité et de sensibilité
- Principes de la qPCR absolue ou relative
- Sélection des gènes de référence et méthode de normalisation, utilisation des logiciels geNorm et NormFinder
- Analyses des données de qPCR, courbes de fluorescence, limite de Ct, réplicats techniques, calcul des variations d'expression, méthode ∆ ∆ Ct
- qPCR en microplaque, carte microfluidique et nanovolumes
- Normes MIQE
Travaux pratiques
- Broyage, extraction, purification des ARN
- Dosage et contrôle qualité des ARN
- Contrôle de la non-contamination des ARN par qPCR
- Etape de transcription inverse
- Contrôle qualité des cDNA par qPCR
- Utilisation d'amorces pour qPCR sybrGreen et/ou TaqMan
- Utilisation de dilutions en série pour la réalisation de gamme de qPCR
- qPCR en microplaque et carte microfluidique
- Calculs et résultats en quantification absolue et en quantification relative, calcul des efficacités, stabilité des gènes de référence utilisés, calcul des variations d'expression
Objectifs de la formation
- Acquérir les connaissances théoriques permettant la réalisation d'un projet de PCR quantitative
- Maîtriser les différentes étapes pratiques nécessaires au projet de qPCR, de l'extraction des acides nucléiques au traitement des données
- Identifier les points critiques pour la bonne réalisation d'un projet de qPCR
Public visé
Chercheurs, ingénieurs et techniciens
Prérequis
Avoir une expérience des techniques de biologie moléculaire
Modalités pédagogiques
Alternance de cours (5H), de travaux dirigés (15H) et de travaux pratiques (14H).
TD et TP en sous-groupe de 2 ou 3 participants maximum avec un intervenant par sous-groupe.
TD et TP en sous-groupe de 2 ou 3 participants maximum avec un intervenant par sous-groupe.
Moyens et supports pédagogiques
EQUIPEMENTS : Broyeur Precellys, Qiacube Qiagen, Nanodrop, Qubit, Bioanalyzer Agilent, TapeStation Agilent, PCR Master cycler Eppendorf, robot EpMotion 5075, qPCR StepOnePLus, qPCR QuantStudio.
Il est conseillé de venir avec son propre ordinateur portable et de se munir d'une blouse de laboratoire.
Des supports papier ainsi que des fichiers aux formats PDF et Excel seront mis à disposition des participants.
Modalités d'évaluation et de suivi
Un suivi individualisé par des évaluations formatives est assuré. Une attestation de fin de formation est délivrée à la fin du parcours.
Formateurs
JE
JACQUET Eric
Responsable scientifique
NN
NHIRI Naima
Responsable scientifique
Modalités tarifaires spécifiques
Nos formations sont exonérées de TVA. Elles bénéficient de remises volumes : - 5% pour 3-4 inscrits, - 10% pour 5-6 inscrits, et - 20% à partir de 7 personnes. Une réduction de 20% est appliquée pour les agents salariés du CNRS.
Informations sur l'accessibilité
Notre laboratoire est entièrement accessible aux personnes à mobilité réduite (PMR). Un accès adapté, des espaces de circulation et des sanitaires spécifiques sont à votre disposition pour garantir votre confort et votre autonomie. Pour toute information complémentaire, veuillez nous contacter.